Сегодня в нашей полезной рубрике для лаборантов публикуем памятку о сложных методах окраски мазков. Сохраните себе!

Существует ряд способов окраски:

Окраска по Граму

1. На фиксированный препарат накладывают кусочек фильтровальной бумаги, на который наливают карболовый раствор генцианвиолета на 1-2 мин (в модификации Синёва используют сухую полоску фильтровальной бумаги).
2. Краситель сливают и, не промывая препарат водой, наливают раствор Люголя на 1 мин.
3. Обесцвечивается с помощью спирта в течение 1-2 минут.
4. Промывается водой.
5. В течение 1-2 минут докрашивается раствором фуксина.

Этот метод окрашивания очень важен при диагностике. Все бактерии по этому способу делятся на граммположительные (темно-фиолетовый цвет) и граммотрицательные (красный цвет). У граммположительных бактерий в клеточной стенке отсутствуют ароматические и серосодержащие аминокислоты, отмечается низкое содержание липидов, у граммотрицательных, наоборот, эти вещества содержатся в большом количестве.

Окраска по Цилю-Нильсену

1. Она предназначена для различения кислостойкой бактерий от некислостийких.
2. Мазок окрашивают карболовым фуксином Циля при нагревании в течение 3-5 мин.
3. Обесцвечивают раствором серной кислоты.
4. Промывают водой.
5. Докрашивают 3-5 минут метиленовым синим.
6. Кислостойкие организмы будут рубиново-красного цвета, некислостойкие – голубовато-синего.

Окраска по Ожешко

От предыдущего метода она отличается тем, что в качестве протравы здесь используется раствор соляной кислоты, который разрыхляет споры, плохо принимает красители. После этого образец можно красить по методу Циля-Нильсена. Цитоплазмы клетки будет синего цвета, а споры – красного.

Окраска по Нейссеру

Она используется для выявления зерен волютина.
1. Мазок красится уксуснокислым метиленовым синим на 4 минуты, после чего краска сливается.
2. Далее промывается раствором Люголя в течение 20-30 секунд.
3. Не промывая водой, красится везувином течение 1-3 минут.
4. Промывается водой, высушивается.

Окраска по Бурри

Этот метод считается отрицательным, поскольку прокрашивается фон, а не сами микроорганизмы. Для этого используются красители, которые не прокрасят бактерии, например тушь. Для этого готовится тушевый препарат: каплю материала смешивают с каплей туши, готовят мазок и высушивают.

Окраска по Морозову

Этот метод предназначен для выявления вирусов, а также микроструктур бактерий, жгутиков и гранул. Суть метода заключается в том, что при обработке аммиачным раствором серебра соль в образце восстанавливается, а специфические ингредиенты объекта приобретают коричнево-черный цвет.

Окраска по Романовскому-Гимзе

Этот метод считается универсальным. Во время окрашивания простейших их цитоплазма становится голубой, а ядра – фиолетовыми. Такой метод используют для исследования спирохет, хламидий, форменных элементов крови.
 
Окраска по Вейгерту

Она предназначена для выявления эластических волокон, прежде всего, в сосудах. Для этого метода используются такие реактивы: раствор перманганата калия, активированный кислотный буфер, раствор щавелевой кислоты, дифференцировочный кислотный буфер, раствор резорцин-фуксина, спиртовой раствор для инкубации.

1. Депарафинований срез поместить в дистиллированную воду.
2. Нанести 10 капель реактива А на 5 минут (для выявления эластических волокон непосредственно в сосудах) или нанести 5 капель реактива А на 5 минут и 5 капель реактива В на 5 минут.
3. Промыть в дистиллированной воде.
4. Нанести 10 капель реактива С на 5 минут. Для выявления эластических волокон в сосудах на дно емкости для инкубации налить 20 капель реактива В, поместить препарат в емкость, предварительно нанеся на срез 10 капель реактива С, закрыть емкость и инкубировать 30 минут.
5. Промыть в дистиллированной воде.
6. Поместить в реактив D, закрыть емкость и инкубировать в течение ночи. Раствор после использования вернуть в оригинальную емкость. Для выявления эластических волокон в сосудах нанести 10 капель реактива D на 2 минуты.
7. Промыть в дистиллированной воде.
8. Промыть в водопроводной воде.
9. Нанести 10 капель реактива Е на 5 минут.
10. Дегидратировать, просветлить, заключить.
Конечный цвет – от темно-синего до коричнево-красного.

И не забывайте, что для точности результатов окрасок надо использовать только проверенные и качественные реагенты!

***
Медринок. Лабораторные реактивы, медтехника, комплектующие
medrynok.com.ua
(093) 39-44-959
(096) 16-12-494